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10%中性福尔马林组织固定液

中性福尔马林固定石蜡包埋组织DNA提取

文章出处:www.knx888.cn责任编辑:中山市康乃欣生物医疗科技有限公司作者:W.人气:-发表时间:2014-12-31 15:46:00【

本篇文章是关于一个我们很少被问问题的题目,因为太简单,方法很常规结果也很少出错。我想说的是:中性福尔马林固定石蜡包埋组织的DNA提取。

什么是FFPE组织?

FFPE指的是为维持细胞核蛋白结构,先用中性福尔马林固定然后固体石蜡包埋,以便使用超薄切片机切成5-10微米厚的薄片的组织样品(通常是疑似肿瘤组织)。福尔马林固定液与蛋白氨基发生了不可逆交联,保护细胞结构完整性,染色显示组织中肿瘤带来的畸形结构。但是,固定剂的交联作用对核酸来说是有害的。中性福尔马林固定液石蜡和交联作用还妨碍了核酸的提取,抑制脱氧核糖核酸聚合酶、PCR扩增,都必须去除。

从这些样品中获取DNA的前景看似很暗淡。幸运的是,我们已经客服了这两种主要障碍,从FFPE组织中获得高质量DNA不再困难。

石蜡如何去除?

传统去除石蜡的方法通常是使用二甲苯,一种高度易燃的有机溶剂。组织切片用二甲苯反复冲洗数次溶解石蜡,然后在DNA提取前再用乙醇反复冲洗去除残余二甲苯。如此反复多次的冲洗步骤,每次都会有少量组织随着石蜡和有机溶剂被冲洗掉。

另一种方法是使用无毒的BiOsticParaffinRemovalReagent(货号:12251-50)。它跟二甲苯一样好用,并且安全,可生物降解。

不去石蜡,还能获得高得率DNA吗?

我很高兴你问到这个问题。是的,能。如果你有办法提高蛋白酶K的活性使其能够穿透石蜡发挥消化功能,那就没必要非得先去掉石蜡了。减少了处理时间又能避免组织损失。

为了达到这个效果,我们推出了一对溶液组合,可制造强变性环境,高温状态下提高蛋白酶K的活性,在石蜡溶解的同时完成组织的消化。如果你有用过BiOsticFFPETissueDNAKit,你就知道他们分别是FP1和FP2溶液。这两种溶液的协同作用使远高于标准蛋白酶K消化缓冲液的活性效果,使获得如下图所示的高得率DNA。在这个例子(由一客户提供)里,每样加入了一块从组织学幻灯片中去除的10微米厚切片。蓝色的样品先用二甲苯预处理,DNA提取按照厂家的操作说明执行,而BiOStic样品则无需石蜡去除步骤就直接进行提取。用分光光度法检测得率。如你所见,每片1-2微克的样品得率从0.5-10μg不等。没有一个个切片结果相近。

中山市康乃欣生物医疗科技有限公司:http://www.knx888.cn

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